siRNA(smallinterferingRNA)和miRNA(microRNA)是通過RNA干擾技術(shù)來抑制基因表達(dá)的短鏈RNA分子。
siRNA/miRNA 轉(zhuǎn)染試劑用于將siRNA和miRNA導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)的化學(xué)物質(zhì)。siRNA是由21到23個核苷酸組成的雙鏈RNA分子,可以特異性地靶向特定基因的mRNA,從而導(dǎo)致其降解或抑制轉(zhuǎn)錄,抑制目標(biāo)基因的表達(dá)。miRNA也是一類短鏈RNA分子,可通過互補(bǔ)配對與mRNA結(jié)合,從而抑制其翻譯成蛋白質(zhì)。
siRNA/miRNA 轉(zhuǎn)染試劑實現(xiàn)siRNA和miRNA的導(dǎo)入過程主要依靠離子性聚合物、脂質(zhì)體、病毒載體等化學(xué)物質(zhì)。這些轉(zhuǎn)染試劑能夠與siRNA/miRNA形成復(fù)合物,通過靶向細(xì)胞膜的特定受體或透過細(xì)胞膜,將復(fù)合物導(dǎo)入細(xì)胞質(zhì)。
siRNA/miRNA 轉(zhuǎn)染試劑的原理可以分為以下幾個步驟:
1.復(fù)合物的形成:將siRNA/miRNA和轉(zhuǎn)染試劑按照一定比例混合,并在適當(dāng)?shù)臈l件下進(jìn)行孵育,使二者形成復(fù)合物。轉(zhuǎn)染試劑可以通過電荷相互作用將siRNA/miRNA包裹在外,增加其穩(wěn)定性和溶解性。
2.細(xì)胞與復(fù)合物的結(jié)合:將復(fù)合物與目標(biāo)細(xì)胞接觸,使復(fù)合物與細(xì)胞表面結(jié)合。轉(zhuǎn)染試劑通常有特異性的受體,可以與細(xì)胞表面的受體結(jié)合,從而促進(jìn)轉(zhuǎn)染復(fù)合物的進(jìn)一步內(nèi)吞。
3.細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)染:復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞后,通過內(nèi)吞作用被包裹在細(xì)胞膜囊泡中,形成內(nèi)吞體。這些內(nèi)吞體隨后會與細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的內(nèi)泡各用途區(qū)域融合,釋放出復(fù)合物,使其進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)。
4.siRNA/miRNA的釋放:一旦復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞質(zhì),轉(zhuǎn)染試劑會與siRNA/miRNA分離,使其能夠與RNA識別復(fù)合物(RISC)相結(jié)合。RISC能夠?qū)iRNA/miRNA導(dǎo)入到供體RNA序列的特定位點(diǎn)上,從而催化特定的基因抑制反應(yīng)。